银纳米颗粒抑制 （H3N2）流感病毒感染

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银纳米颗粒抑制 （H3N2）流感病毒感染

Inhibition of A-Human-Hubei-3-2005 (H3N2) influenza virus inf小屏笔记本ection by silver nanoparticles in vitro and in vivo.pdf4.9M · 百度网盘

银纳米颗粒除了对已被验证的单细胞病原菌有强效杀菌力，其同样对高发的流感病毒有显著的抗病毒活性。针对银纳米颗粒这一抗病毒活性，一些国外学者在《国际纳米医学杂志》上发表了署名为“银纳米颗粒抑制 A /人法律基本知识类/湖北/ 3/2005（H3N2）流感病毒感染-体外和体内验证”的论文（见附件）。

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银纳米颗粒抑制 A /人类/湖北/ 3/2005（H3N2）流感病毒感染-体外和体内验证

摘要：银纳米颗粒（AgNPs）作为抗菌剂已引起广泛关注，并已显示出对多种病毒的有效抑制活性，这些病毒包括人类免疫缺陷病毒，乙型肝炎病毒和 Tacaribe 病毒。在这项研究中，我们调查了 AgNPs 是否可以在 A /人类/湖北/ 3/2005（H3N2）流感病毒感染中具有抗病毒和预防作用。与流感病毒对照组和用溶剂制备的 HNN 感染的 Madin-Darby 犬肾细胞相比，AgNP 处理的 H3N2 流感病毒感染的 Madin-Darby 犬肾细胞具有更好的生存力（相对于流感病毒对照，P，0.05），没有明显的细胞病变作用。 AgNPs。血凝试验表明，AgNPs 可以显着抑制 Madin-Darby 犬肾细胞中流感病毒的生长（相对于流感病毒对照，P，0.01）。 AgNPs 在三种不同的治疗途径上显着降低了 H3N2 流感病毒诱导的细胞凋亡（相对于流感病毒对照，P，0.05）。用 AgNPs 处理的 H夹板龟3N2 流感病毒通过透射电子显微镜进行分析，发现彼此相互作用，从而在 30 分钟至 2 小时的时间范围内以时间依赖的方式破坏了形态病毒结构。另外，在小鼠中鼻内施用 AgNP 显着提高了感染 H3N2 流感病毒后的存活率。用AgNPs 处理的小鼠肺组织中的病毒滴度较低，病理组织损伤较小，并淘宝店装修且在体内二次鼻内传代过程中具有明显的生存获益。这些结果提供了证据，表明 AgNPs 在体外和体内均具有预防 H3N2 流感病毒感染的有益作用，并证明 AgNPs 可用作抑制流感爆发的潜在疗法

介绍

在全球主要的传染病中，流感是发病率和死亡率的主要原因，它会定期引起复发性流行病或全球性流行病，可能导致全球约 20％的人口患病。流感病毒（IFV）是负链 RNA 病毒，属于正粘病毒科。根据血凝素（16 个亚型，H1-H16）和神经氨酸酶（9 个亚型，N1-N9）分子的抗原性将它们分为不同的血清型，但是 H1，H2 和 H3 以及 N1 和 N2 在人类中普遍存在。 当血凝素或神经氨酸酶抗原中出现小突变时，就会发生抗原漂移，这与遗传转移是不同的，当不同的 IFV 株相互重组时，就会出现全新的菌株。抗原突变或重组都可能导致新的致病性具有引起新的流行病或全世界大流行病的能力的 IFV 毒株。许多流感变体已经进化，并具有发展抗病毒药耐药性的潜力。当前，用于控制流感流行的两个主要策略是注射疫苗和抗病毒剂。但是，IFV 疫苗在流行的早期阶段几乎没有效力，尤其是一种由新病毒亚型的遗传转移产生的疫苗。目前广泛用于流感的两类抗病毒药物是 M2 通道阻滞剂（金刚烷衍生物和神经氨酸酶抑制剂（奥司他韦 oseltamivir 和扎那米韦 zanamivir），但它们对 IFV 的长期有效性尚有争议，并且如何申请域名由于耐药性和副作用的增加而受到限制。鉴于目前可用的治疗方案在流感大流行中，一直需要减少病毒进程和传播的新方法，特别是开发可提供广谱保护的抗 IFV 药物。 银纳米颗粒（AgNPs）已显示出令人鼓舞的抗菌和抗真菌活性，这主要是由于 Ag +离子的释放抑制了呼吸酶的作用。AgNPs 在病毒性疾病（例如人类免疫缺陷病毒-1，乙型肝炎病毒，1 型单纯疱疹病毒和猴痘病毒和 Tacaribe 病 毒。AgNP 发挥抗病毒作用的机制尚不清楚。 最近，我们证明了 AgNP 对 Madin报童模型-Darby 犬肾（MDCK）细胞中的 H1N1 甲型流感病毒具有有效的抑制作用。在这项研究中，为了确定是否也可以在不同的 IFV 菌株中观察到这些有希望的结果，我们探索了 AgNPs 在体外和体内对 H3N2 IFV 的抗病毒治疗作用。我们使用了一系列体外试验来评估 AgNPs 预防 MDCK 细胞中病毒感染的能力，并建立了被 H3N2 IFV感染的小鼠模型以研究其在体内的保护作用。结果表明，AgNPs 可以与 H3N2 IFV 相互作用，并有效地防止 MDCK 细胞和小鼠感染该病毒，这表明 AgNPs 可能在提供广谱保护的抗病毒应用中引起极大兴趣。

材料和方法细胞与病毒

从美国典型培养物保藏中心（ATCC；美国弗吉尼亚州马纳萨斯）购买的 MDCK 细胞保存在补充有 10％热灭活胎牛血清（Hyclone，Logan， 美国 UT）。 适应小鼠的甲型流感病毒（H3N2亚型 A /人类/湖北/ 3/2005）由陈旭林教授（中国科学院武汉病毒研究所）友情提供。 H3N2IFV 在 10-11 天大的有胚鸡蛋中繁殖，然后收集鸡蛋尿囊液并储存在-80°C 下，直到用于细胞培养和接种小鼠。AgNP 的制备通过氧化还原反应，将硝酸银（2 mL，100 mM），碳酸钠（0.4 mL，120 mM）和单宁酸（2mL，5.8 mM）加入终体积为 50 mL，从而获得球形 AgNP。 蒸馏水，用 1 M HCl 或 5 M NaOH将最终 pH 调节至 7.4。 然后将混合物在剧烈搅拌下回流 2 小时，直到浅黄色没有可见的变化，表明形成了 AgNP。 银的合成效率通过电感耦合等离子体发射光谱法或以下公式计算：1-合成溶液中的游离银/用于合成的总银量 × 100%

细胞活力测定

如我们最近的出版物中所述，通过基于 Mosmann 的 3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四唑溴化物（MTT）测定法确定了 AgNPs 及其制备 AgNP 所用溶剂的毒性作用。 根据结果，浓度为 6.25μg/ mL 至 50μg/ mL 的溶剂和 AgNP 对细胞没有明显的毒性作用。 在这项研究中，使用三种浓度（即 12.5、25 和 50μg/ mL）进行进一步的测定。 对于细胞生存力测定，在感染前，先用 AgNPs 处理 H3N2 IFV 2 小时，再使用 MDCK 细胞感染 2 小时。 正常孵育48 小时后，将 H3N2 IFV 对照和溶剂组作为对照（每组 n = 5）。 通过 MTT 分析评估细胞活力，并在光学显微镜下观察细胞病变效应（CPE）。

血凝试验

为了确定 AgNP 对 IFV 生长的影响，将 MDCK 细胞用 H3N2 IFV 感染，然后将其用 AgNP（12.5、25 或 50μg/ mL）预处理 2 小时。 作为病毒生长和复制以及血细胞凝集活性增加的指标，孵育 48 小时后收获细胞培养物上清液，以测量带有 V 形底部的 96 孔微孔板中的血凝素滴度，如其他地方所述。 将 0.5％的鸡红细胞悬浮在磷酸盐缓冲液中，并将细胞上清液在室温下孵育 1 小时。 病毒滴度表示为 log 10/ mL。 该测定一式三份，包含 IFV 和溶剂对照。

流式细胞仪分析

据报道，IFV 可以诱导细胞凋亡。用流式细胞仪确定了 AgNPs 对 H3N2 IFV 诱导的细胞凋亡的保护作用。在 4°C 下用 H3N2 病毒和 AgNPs（12.5、25 或 50μg/ mL）的混合物感染 MDCK细胞 1 小时。在用冰冷的磷酸盐缓冲盐水漂洗两次并在室温下孵育结合缓冲液（包含 10％胎牛血清，0.1 mg / mL 转移 RNA 和 0.1 mg / mL 牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲盐水）30 分钟后，加入碘化丙啶并在避光的情况下在 4℃下孵育 30 分钟。然后将细胞洗涤三遍，重悬于 150μL 磷酸盐缓冲盐水中，并进行流式细胞仪分析。感染前组（感染病毒 2 小时的细胞，然后与 50μg/ mL AgNPs 一起孵育 2 小时）和感染后组（感染 50μg/ mL AgNPs 的细胞，再 2小时孵育，另外 2 个细胞）同时进行了时间平行测定细胞凋亡。该测定一式三份，包含 IFV和溶剂对照。

免疫荧光分析

bt种子下载器 将 MDCK 细胞（1×105）接种到盖玻片上，在 37°C 下放置 24-48 小时，然后用 H3N2 IFV 和50μg/ mL AgNPs 的混合物感染 2 小时。平行于不同组进行相同的测定，即未处理的细胞组，IFV 对照组，溶剂对照组，感染前组（感染病毒 2 小时，然后与 50μg/ mL AgNPs 一起孵育2 小时） 和感染后组（将细胞与 50μg/ mL AgNPs 孵育 2 小时，然后再感染病毒 2 小时）。当 IFV 对照组出现明显病变时，将细胞用 4％戊二醛固定 1 小时，然后在室温下用 0.5％牛血清白蛋白在磷酸盐缓冲液中封闭另外 1 小时。用冷的磷酸盐缓冲盐水漂洗两次后，将细胞用抗血凝素异硫氰酸酯偶联的抗体（Dako Cytomation，England）在 37℃下染色 60 分钟。然后加入筛选试剂并孵育 30 分钟。将载玻片安装在荧光英语实验班显微镜下（奥林巴斯，美国宾夕法尼亚州中心谷）可视化。

透射电子显微镜分析

为了说明 AgNP 与 H3N2 IFV 之间的相互作用，使用透射电子显微镜（TEM； Hitachi，东京，日本）对经 AgNP 处理的 张淑侠H3N2 IFV 进行了负染色和形态分析。在 50μg/ mL AgNPs 处理 H3N2 IFV 之后， 在不同的时间点（30、60 和 120 分钟），将混合物附着到涂有碳的胶棉格栅（300目；日本东京的 Nisshin EM Co.，Ltd.）的顶部 10 分钟。 用在 Sorensen 磷酸盐缓冲液（0.06M，pH 6.5）中的 2％磷钨酸将网格染色 2 分钟。 冲洗并风干载玻片后，通过 TEM 检查栅格。

体内研究

将 32 只 8-10 周大的 BALB / c中国mba 雌性小鼠（大连医科大学实验动物中心，中国大连）随机分为四组，即磷酸盐缓冲盐水对照组，H3N2 IFV 对照组，以及两个 AgNP 和奥司他韦的治疗后组（用作阳性对照）。麻醉 IFV 对照组，AgNP 和奥司他韦治疗组中的所有小鼠，并用20μLH3N2 IFV 鼻内感染。感染后最初 24 小时向麻醉的小鼠施用 AgNPs 和 oseltamivir，此后每 24 小时分别通过鼻内吸收将其分别以 5 mg / kg 和 20 mg / kg 的浓度给药 3 次。直到第14 天每天都记录临床体征，体重变化和死亡率，IFV 对照组和其他三组的小鼠在第 6 天以异氟烷过量而处死。提取肺，用 2mM 乙二胺四乙酸（EDTA）磷酸缓冲盐水洗涤，并保持在-80℃直至进一步实验。将肺组织的一部分匀浆并鼻内给药以用于小鼠感染的第二次传代。所有实验均由大连大学医学院的机构动物护理和使用委员会批准并指导。

肺比例计算和病毒

小鼠滴度

处死小鼠后，随机选择三只小鼠，并用等式（肺的重量/小鼠的重量）×100％称重它们的肺的肺指数。 将肺匀浆以 10,000 g 离心 10 分钟，然后收集上清液，通过上述标准血凝素测定法测定病毒滴度。

肺组织学分析

处死后，将每只小鼠的右肺中叶切除，并在 10％甲醛溶液中固定 24-48 小时。 以分级乙醇系列将组织脱水并包埋在石蜡中。 将切片包埋在蜡中，切成 5μm切片以进行苏木精和曙红染色，并通过光学显微镜研究病理变化。

统计分析

所有数据均显示为平均值±标准偏差。 使用单向方差分析来确定组之间的统计学显着性差异。 统计学显着性设定为 P，0.05。、

结果

AgNPs 的表征和稳定性

通过 TEM 评估了这项研究中生成的AgNP，并随机选择了多个 TEM 图像，并测量了 300 多个纳米颗粒以确定其大小。 通过 TEM 观察，单分散的 AgNP具有约 9.5nm 的平均直径和约 0.8nm的标准偏差（图 1）。 纯银的合成效率约为 99.99％，AgNPs 和银的终浓度分别为400μg/ mL 和 0.8μg/ mL。 AgNPs具有非常窄的尺寸分布，并且在室温下六个月内稳定，没有明显的颗粒沉淀。

AgNPs 的抑制作用对抗 H3N2 IFV

为了研究 AgNP 对 H3N2 IFV 的抑制作用，通过MTT 测定法确定存活的 MDCK细胞的百分比。在以不同浓度（12. 5、25 或 50μg/ mL）的 AgNPs 处理病毒 2小时后，再与 MDCK 细胞孵育 2 小时，细胞活力为 53.46％±2.98％，68.23％±5.11％和正常孵育 48 小时后（图 2A），分别为 80.27％±1.43％（图 2A），而 IFV 对照细胞和经 HCV 混合处理的细胞的存活率分别为 21.66％±4.72％和 23.92％±6.32％病毒和溶剂。AgNP 组和 IFV 对照组的数据有显着差异（P，0.01）。此外，在光学显微镜下观察到了 AgNPs 的抗 H3N2IFV 效应，在正常细胞组（图 2B）或溶剂细胞组（图 2C）中均未观察到明显的 CPE，表明所用溶剂因为 AgNP 对 MDCK 细胞没有毒性。但是，在IFV 对照组（图 2D）和用 H3N2 IFV 和溶剂的混合物处理的细胞（图 2E）中观察到典型的 CPE，被感染的细胞单层收缩并变成圆形，折断，脱离细胞培养物烧瓶，并漂浮在培养基中。在用病毒和50μg/ mL AgNP 的混合物感染的细胞中未检测到显着的 CPE（图 2F），表明此浓度的 AgNP 对 H3N2 IFV 感染具有抑制作用。

AgNPs 在体外抑制 IFV 的生长

为了进一步了解 AgNPs 的保护作用，我们通过血凝素测定法确定了 AgNPs 对病毒生长的抑制作用。 与 IFV 对照相比，最低浓度的 AgNPs（12.5μg/ mL）导致血凝素活性下降了约 2 倍，统计学上显着（P，0.01，图 3）。 随着 AgNPs浓度的增加，血凝素滴度的下降更大，这表明AgNPs 可以有效地抑制 IFV 的体外生长。 IFV对照组的细胞与病毒和溶剂杨斯混合组的细胞之间的血凝素滴度没有差异（P.0.05，图 3）。 此外，当使用 H3N2 IFV 和 AgNPs 的混合物感染卵时，可获得类似的抑制作用（数据未显示）。

AgNPs 的保护作用对抗细胞凋亡

正常细胞的凋亡率为 6.31％±2.16％，而在 IFV对照细胞和用溶剂和病毒处理的细胞中，其凋亡率分别为 25.29％±3.66％和 23.96％±2.78％（图 4）。 在孵育之前用不同浓度（12.5、25或 50μg/ mL）的 AgNPs 处理病毒后，MDCK 细胞的凋亡分别为 17.15％±4.35％，2.47％±2.52％和 8.27％±3.26％。 ; 这些数据显示出统计学上的显着差异（与 IFV 对照相比，P，0.05）。此外，感染前和感染后组的细胞凋亡率与 IFV对照组相比有显着差异（分别为 13.58％±4.86％和 17.47％±5.13％，P，0.链条包05）。 这些结果表明 AgNPs 能够减少由 H3N2 IFV 诱导的 MDCK 细胞凋亡。

免疫荧光分析

为了进一步研究 AgNPs 是否会影响病毒感染细胞，对血凝素蛋白进行了免疫荧光染色测定。正常细胞没有特殊的颜色，并具有正常的细胞结构（图 5A），而在 IFV 对照细胞（图 5B）和用病毒和溶剂混合物处理的细胞中（图 5C）观察到了广泛的特异性黄色荧光。 细胞回滚，变圆，分离并从烧瓶中掉落。 但是，偶尔会在用 AgNP 和 H3N2 IFV 混合物感染的细胞中以及在感染前和感染后组（图 5E 和 F）中看到荧光。 总体而言，AgNPs 表现出明显的抗 H3N2 IFV 活性，这可能是由于 H3N2 IFV 对 MDCK 细胞的吸附干扰所致。

AgNP 处理的病毒的形态异常

TEM 观察到 H3N2 IFV 颗粒被染色阴性，以说明 AgNP 与 IFV 之间的相互作用。 IFV 对照大约 80-120 nm，显示出典型的椭圆形或球形正常 IFV，其中包含病毒基质和衣壳（图 6A）。AgNP 与 H3N2 IFV 相互作用 30 分钟后，病毒形态发生了轻微变化，在病毒边缘附近观察到很少的 AgNP（图 6B）； AgNP 与病毒相互作用 60 分钟后，部分病毒边缘消失了（图 6C）。相互作用 120 分钟后，病毒的形态结构几乎被破坏了（图 6D）。 这些结果表明，AgNPs 可以与病毒颗粒直接相互作用并破坏病毒的形态结构，从而导致病毒功能以时间依赖性方式破坏。

AgNPs 体内抑制 H3N2 IFV 感染

确定发病率和死亡率以检查 AgNP 在保护活体动物中预防 H3N2 IFV 感染中的潜在作用。 IFV对照组中的所有小鼠在感染后第 7 天死亡，并表现出严重的体菊池雄星重减轻。相反，仅经过脚本是什么意思三个周期的治疗，即使存活的小鼠与磷酸盐缓冲盐水对照组相比，可见存活的小鼠体重减轻，但用 AgNPs 和奥司他韦治疗的小鼠的存活率分别为 75％和 88％（图 7A）和 B）。为了更好地了解 AgNPs 如何预防 IFV 感染，采集了小鼠的肺以检测肺的比例和病毒滴度。在 IFV 感染的小鼠中，肺部比率约为磷酸盐缓冲液对照组的三倍（图 7C），与磷酸盐缓冲液对照组相比，AgNP 和奥司他韦组的肺部变化较小。肺部比率是肺部病变水平的可靠指标；高水平时，肺细胞内部的细胞炎性和细胞溶胶渗透性可能增加，从而导致细胞水肿和肺部比率增加。AgNP 和奥司他韦组的肺病毒滴度降低了>0.2 log10 倍。 IFV 控件（图 7D）。该发现表明鼻内施用 AgNP 和奥司他韦可以保护小鼠免受 H3N2 IFV 感染。另外，通过组织学分析检查 病理组织改变。 与磷酸盐缓冲盐水对照组相比（图 7Ea），在用奥司他韦治疗的小鼠中观 察到肺泡结构的微小变化（图 7Eb）。 在使用 AgNPs 的小鼠中，在肺泡隔中发现了一些淋 巴细胞浸润（图 7Ec），在被游离 IFV 感染的小鼠中，这种浸润更为明显并伴有肺泡壁坏死 （图 7Ed）。 这些结果表明，AgNPs 可以抑制 IFV 在小鼠肺中的转染和复制。我们重复了 体内实验，并准备了肺匀浆用于小鼠的第二代传代。 感染后 2 周，AgNPs 和奥司他韦都能 够显着增加存活小鼠的百分比（表 1）。 综上所述，这些数据表明鼻内施用 AgNPs 可以在 体内保护小鼠免受 H3N2 IFV 感染。

讨论区

流感大流行严重威胁公众健康，但是由于副作用和治疗过程中耐药菌的出现，目前用于流感的抗病毒药物被削弱了。由于需要，疫苗也有其缺点。它们与新的病毒株紧密匹配，从而有效地杀死了病毒。因此，在治疗和控制流感中对新的抗病毒药物有很高的需求。在本研究中，我们选择了高致病性的 IFV 株 H3N2 作为病毒模型，并评估了 AgNPs 对 H3N2 IFV的抗病毒作用。为此，我们基于细胞培养进行了一系列体外测定，建立了 IFV 体内感染动物模型，并证明 AgNPs 是可以有效抑制 IFV 感染的潜在疗法。

MTT 测定法由于其灵敏性和快速响应性，通常用于测量细胞活力。在这项研究中，与 IFV对照和溶剂组相比，将细胞与 AgNPs 和 H3N2 IFV 的混合物孵育时，MDCK 细胞的活力显着增加，并且未观察到明显的 CPE。这些结果表明，AgNP 可以预防 MDCK 细胞被 H3N2 IFV感染。另外，在荧光染色分析中，在用 AgNPs 处理的细胞中未观察到明显的荧光，这研究了 AgNPs 可用于破坏病毒表面的结构从而抑制病毒附着于宿主细胞。同样，研究表明 AgNPs可以减少猴痘病毒诱导的病毒斑块的形成。

流感病毒包含两种主要功能性糖蛋白，即血凝素和神经氨酸酶，它们包裹着内核。血凝素蛋白是病毒包膜的结构成分，具有血凝活性，有助于识别并结合宿主膜受体位点，从而病毒衣壳和基因组的进入以及宿主的感染。因此，血凝素蛋白可能是抗病毒药物的靶标。用AgNPs 处理 H3N2 IFV 后，当将细胞与 AgNPs 和 H3N2 IFV 组合孵育时，病毒血凝素滴度显 着降低多达两个 log10。

这些结果表明 AgNPs 可以抑制 H3N2 IFV 的生长，并且血凝活性可能与抗病毒作用的机制有关。 AgNPs 可能会干扰病毒血凝素与细胞受体的结合并抑制病毒 进入过程，这与观察到的 AgNPs 可以通过阻止巨噬细胞增多的机制阻止病毒进入宿主细胞 来抑制牛痘病毒感染有关。血凝素分子具有两个二硫键，可被破坏以暴露可与宿主细胞相 互作用的受体结合位点。这些暴露的二硫键是 AgNP 与病毒之间相互作用的诱人位点，因 此当受体结合时表现出抗病毒活性 AgNPs 位点被 AgNPs 阻断。

与本研究一致，其他研究人 员表明，大小为 1-10 nm 的 AgNPs 可以与病毒结合并与 gp120 糖蛋白的暴露的含硫残基结 合，有助于抑制病毒和宿主细胞之间的结合。也有的报道 AgNPs 可以发挥抗人类免疫缺陷 病毒的功能。在病毒复制的早期和进入后的阶段，通过阻止受体依赖性病毒体的结合，融 合和感染性，AgNPs 与 gp120 糖蛋白结合来实现其功效。 为了进一步证实我们在体外的发现，在 24 小时的间隔内，用 A灵顺寺gNPs 或奥司他韦对 H3N2 感染的小鼠进行了 3 次后处理，并在杀死小鼠后评估了肺病毒滴度。与未经治疗的小鼠相 比，用 AgNPs 或奥司他韦进行后处理可导致肺病毒效价显着降低（约 3 倍 log10）。

肺病毒复制的这种明显控制表现，与奥司他韦相比，AgNPs 在体内抑制病毒生长中可能起重要作 用，这表明 AgNPs 在体内可能具有明显的抗 H3N2 作用。支持该结论的是，收集了肺匀浆， 并通过鼻内感染传代入小鼠体内。与源自游离 IFV 感染的小鼠相比，被源自用 AgNPs 和奥 司他韦治疗的小鼠的肺匀浆感染的小鼠能够维持更长的寿命。在这方面，我们的数据表明， 鼻内施人力资源管理书籍用 AgNPs 能够使 AgNPs 成为体内强有力的杀病毒剂，以预防 H3N2 病毒感染。 流感病毒包膜主要来自宿主细胞膜，在功能上可用于病毒进入宿主细胞。为此，病毒包膜和衣壳的破坏可能有助于分离病毒体与细胞表面的结合，从而导致病毒对宿主细胞的消毒。

在这项研究中，形态学分析了 AgNPs 处理的 H3N2 病毒的阴性染色。发现在用 AgNPs 处理30 分钟至 2 小时后，产检费用大多数 H3N2 病毒结构不调查问卷清楚。这些结果表明 AgNPs 可能对病毒进入宿主细胞有负面影响。 AgNP 可以直接与 H3N2 病毒衣壳蛋白相互作用，从而抑制受体介导的病毒结合和胞齐秦和王祖贤吞作用。与我们的研究一致，Speshock 等人报道 AgNPs 可以与病毒糖蛋白结合，并在与宿主细胞相互作用之前使病毒功能失活。此外，直径 10 nm 的圆形 AgNPs可以阻止猴痘病毒的结合和渗透进入宿主细胞。 H3N2 形态的变化可能提供了一种可能的机制，即 AgNP 对 IFV 颗粒的作用可能是杀病毒的，而不是抗病毒的，从而有助于病毒对AgNP 的结合，扩散和进一步复制的干扰。

已知 AgNP 在体外可有效抑制多种病毒，而 AgNP 对流天才第一步感病毒感染的体内作用仍然未知。在这项研究中，我们调查了使用 H3N2 病毒感染的小鼠模型通过鼻内递送 AgNPs 对流感病毒的抑制作用。通过鼻内给药对 AgNPs 进行后处理的保护作用很强，表明 AgNPs 对 H3N2 病毒感染具有显着的抗性。即使观察到轻微的体重减轻，用 AgNP 治疗的小鼠也没有表现出明显的疾病症状。向感染 H3N2 病毒的小鼠鼻内施用 AgNPs 和 oseltamivir 具有显着的生存获益，并且在肺组织中仅见较小的病理性病变。据报道，每天使用人参可显着提高疫苗接种效率并减少流感症状病例。进一步的研究应探讨 AgNPs 与疫苗接种的组合是否可提高抗流感病毒感染的实时疗效。 AgNPs 抗病毒活性的分子机制仍然未知。可溶性 Ag +离子可通过下调呼吸酶，抑制电子传输成分以及干扰 DNA 的功能来强烈抑制病原体的生长。

本研究结果表明，AgNPs 具有多种作用于 IFV 感染的作用机制直接杀病毒颗粒或抗病毒剂。需要进一步研究所涉及的抗病毒机制。

结论

在这项研究中，我们使用 H3N2 IFV 作为病毒模型，通过在体外（MTT，血凝素，流式细胞仪，免疫荧光和 TEM）和体内（IFV）进行一系列测定，研究 AgNP 对流感病毒的抑制活。感染的小鼠模型）。在体外，AgNP 通过增加细胞的存活力和保护 CPE，抑制病毒的生长并减少 H3N2 IFV 诱导的细胞凋亡，从而显着保护细胞免受病毒感染。 AgNP 与病毒颗粒相互作用并以时间依赖性方式破坏其形态结构。此外，鼻内给予 AgNP 可以显着提高小鼠的存活率，阻止其肺部病毒的生长，抑制病理性肺部病变的发展，并在次生传代中具有明显的存活益处。两者合计，结果表明，AgNPs 通过多种机制具有针对 H3N2 IFV 的有希望的抗病毒活性，表明优化的 AgNPs 的开发和对其相关抗病毒机制的进一步研究对于控制流感暴发至关重要。

本文标签： 流感纳米颗粒病毒感染抑制